【技語】熒光原位雜交知多少?—第二篇<工欲善其事,必先利其器>

中杉金橋2021-08-29 09:26:58


二、工欲善其事,必先利其器

目前市場上在售的FISH探針,顏色各不相同,那是因為標記的熒光素各不相同,主要的有以下幾種:


?熒光想被看到,需要被特殊光源激發后通過合適的濾光片才行,所以,探針生產商會在說明書上標明自己生產探針所使用的熒光素種類,然后建議“顧客使用探針前向濾片組供應商了解所使用的濾片組的詳細情況,以便選擇與標記熒光染料相適應的濾片組”。選擇合適的濾光片是非常重要的,畢竟我們通過觀察FITC的濾光片怎么也看不見Cy3不是?

以常見的奧林巴斯BX53顯微鏡為例(其他品牌也差不多),它的濾光單元長這樣:


上圖中手里拿著的小結構就是已經裝了盒的濾光片。用來觀察FISH實驗結果的熒光顯微鏡,通常至少安裝有3組濾光片,分別用來觀察橙色、綠色以及藍色的熒光。濾光片可以單獨安裝,所以,實驗室如果已安裝了熒光顯微鏡,那么在開展了新項目包含了新的熒光素種類時,拓展一個相應的濾色片就可以。

熒光顯微鏡中,除了濾色片,激發光源也需要注意,目前大多數熒光顯微鏡使用的是汞燈作為光源,而汞燈是有使用壽命的。所以,用了一段時間后,激發出的光變的弱了,老師,您的顯微鏡不是壞了,只是汞燈老了,換個嫩的就行。

FISH實驗中,主要的儀器除了熒光顯微鏡,還有原位雜交儀:


原位雜交儀承擔了探針和樣本變性以及雜交的重任,可以提供精確且均一的溫度。

原位雜交儀不僅可以用來進行熒光原位雜交的實驗,也可以做原理類似的其他標記物(例如地高辛)標記的原位雜交實驗。


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